Los métodos espectroscopios de análisis se basan en la medida de la radiación electromagnética emitida o absorbida por la materia. Los métodos de emisión utilizan la radiación emitida cuando un soluto es excitado por energía térmica, eléctrica, o energía radiante. Los métodos de absorción, por el contrario, están basados en la disminución de la potencia (o atenuación) de la radiación electromagnética como consecuencia de la absorción que se produce en su interacción con el soluto.

Los métodos espectroscópicos se consideran como una de las mejores y más utilizadas técnicas instrumentales a disposición del científico, para la adquisición de información tanto cuantitativa como cualitativa.

Los métodos espectroscópicos se clasifican según la región del espectro electromagnético que esté implicada; siendo las más importantes las regiones de rayos X, ultravioleta, visible, infrarroja, microondas y radiofrecuencia.

Se denomina absorción al proceso por el cual una especie, en un medio transparente, capta selectivamente ciertas frecuencias de la radiación electromagnética.

Los métodos de absorción poseen la considerable ventaja de producir poca o ninguna alteración en el sistema estudiado.

Los colorímetros utilizan el ojo humano como detector y el cerebro como transductor. Sin embargo, el ojo y el cerebro solamente pueden comparar colores. Como resultado, los métodos calorímetros requieren siempre la utilización de uno o mas patrones en el momento en el que se realiza el análisis. Otras desventajas consisten en que el ojo humano responde a un intervalo espectral relativamente limitado (400 a700 nm), y es incapaz de realizar la comparación requerida si la solución del soluto contiene una segunda sustancia coloreada. Finalmente el ojo no es tan sensible a pequeñas diferencias en la absorbancia como lo es un detector fotoeléctrico; en general, no se pueden discernir diferencias de concentración menores del 5 por 100 aproximadamente.

Un fotómetro es un dispositivo sencillo relativamente barato para los análisis por absorción, posee fácil mantenimiento y resistencia que pueden no tener espectrofotómetros más sofisticados. Además, cuando en el análisis no se necesita una pureza espectral elevada (y frecuentemente es así), el fotómetro proporciona medidas tan precisas como las obtenidas con instrumentos más complejos.

Un espectrofotómetro está equipado con un monocromador de prisma o red, que permite la selección de cualquier longitud de onda dentro de la capacidad del instrumento. Los espectrofotómetros son adecuados para realizar medidas en las regiones ultravioleta, visibles e infrarroja.

Los patrones de calibración para un análisis fotométrico o espectrofotométrico deben ser tan semejantes como sea posible a la composición total de las muestras, y deben abarcar un intervalo razonable de concentraciones del soluto. En raras ocasiones, o casi nunca, se puede suponer que se cumple la Ley de Lambert-Beer y utilizar un patrón único para determinar la absortividad molar; todavía es aún menos prudente basar los resultados de una análisis es un valor de absortividad molar obtenido de la literatura.

• Medición cuantitativa del poder reductor de un glúcido con el método de Somogyi-Nelson.

 

• Someter al procedimiento de Somogyi-Nelson soluciones de glucosa de concentraciones diferentes y conocidas y solución de concentración desconocida.
• Medir en el fotocolorímetro la intensidad del color desarrollado, habiendo seleccionado previamente el filtro apropiado para el instrumento.

 

• Confeccionar una gráfica con los resultados obtenidos, colocando en la abscisa las concentraciones de glucosa y en la ordenada las lecturas del fotocolorímetro.
• Calcular el factor de calibración.
• Calcular en microgramos/ml y en micromoles/ml.

La mejor longitud de onda que pasa por el origen es de 540, registrando la concentración de la muestra problema con los datos de la absorbancia y la constante de calibración promedio de aquella longitud de onda. Demostrando así la ley de Lambert-Beer que establece una proporcionalidad directa entre la concentración e intensidad del color de una sustancia en solución medida como absorbancia.

El papel que cumple los reactivos de Somogyi y Nelson es: el reactivo de Somogyi al actuar este con la glucosa el cual es una azúcar reductor, reduce al ion cúprico en ion cuproso, en medio alcalino caliente. El reactivo de Nelson posee ácido arsenico-molibdoso Mo+4 el cual solubiliza al ion cúprico, reduciéndose a Mo+2 (suboxidomolibdeno), dando un color azul proporcional a la cantidad de glucosa presente.

• Manual de laboratorio de Bioquímica General .
• Sook/West : Qumica Analitica, tercera edición.