RESUMEN 

En el presente trabajo se emplearon anticuerpos monoclonales E1, A3 y P3 de nueva generación  para conocer la localización de las moléculas reconocidas por estos anticuerpos en el tejido fetal humano. Se emplearon además fragmentos de tejidos fetales, con edades gestacionales comprendidas entre 12 y 24 semanas. El  anticuerpo monoclonal A3 reconoció células gliales del cerebro, cerebelo y médula espinal. El anticuerpo monoclonal P3 identificó células gliales del cerebelo y células epiteliales en el intestino delgado y en el músculo liso del estómago. El anticuerpo monoclonal E1 reconoció células gliales del cerebro y células epiteliales de Intestino delgado. 

Palabras claves:

Gangliósidos

Anticuerpos monoclonales

Inmunohistoquímica

Tejido fetal

Inmunodetección 

INTRODUCCIÓN

Los Gangliósidos constituyen un subgrupo de glicoesfingolipidos que contienen ácido siálico y están concentrados en células ganglionales del Sistema Nervioso Central (S.N.C), especialmente en las terminaciones nerviosas (1, 2,3)

Inicialmente la distribución de Gangliósidos se restringió a la sustancia gris del S,N.C (4,5) Reportes más recientes plantean que todos los tipos celulares contienen Gangliósidos, aunque continua siendo el S.N.C quién contiene las mayores concentraciones.

En los últimos años algunas investigaciones han sugerido la presencia de Gangliósidos N glicosilados como antígenos específicos de células tumorales (6,7,8,9)  La presencia de compuestos N glicosilados en tumores de células germinales y en cáncer de colon ha sido también confirmado en estudios recientes utilizando varios anticuerpos monoclonales generados contra  Gangliósidos N glicosilados(9,10)

En las múltiples investigaciones realizadas en la búsqueda de un marcador molecular de valor pronóstico, los Gangliósidos fueron lógicos candidatos, porque están presentes en altas concentraciones en el S.N.C y en menor cuantía en el resto de los tejidos.

Teniendo en cuenta el patrón de expresión de gangliósidos que ha sido observado en tejido adulto nos propusimos el siguiente objetivo:

• Localizar los antígenos reconocidos por los anticuerpos monoclonales  E1, A3 y P3  en el tejido fetal humano.

RESULTADOS 

Los tejidos estudiados fueron agrupados por sistemas:

Los órganos del S.N.C fueron reconocidos por los tres anticuerpos monoclonales antigangliósidos, con predominio del anticuerpo monoclonal  A3, fundamentalmente en Cerebelo y Médula Espinal (Tabla No 1)

Las intensidades oscilaron entre moderada e intensa en Cerebro y entre leve y moderada en Cerebelo y Médula Espinal.

Empleando además anticuerpos que reconocen estirpe celular fue localizada la positividad de la reacción a nivel de células gliales, específicamente a nivel de los  astrocitos. En el S.N.C la inmunoreacción con el anticuerpo monoclonal A3 predomina en el período comprendido entre las 12 y 20 semanas de desarrollo.

Los órganos del sistema digestivo fueron reconocidos por los tres anticuerpos monoclonales con un marcado predominio en el Intestino Delgado y en segundo lugar en el Intestino Grueso(Tabla No 2)

Las intensidades de la reacción oscilaron entre moderadas e intensas, con predominio de la primera. La localización del reconocimiento fue a nivel del borde apical  y las secreciones producidas por las células epiteliales del tubo digestivo, identificados por los anticuerpos que reconocen estirpe celular y secreciones.

Durante todo el período fetal estudiado las muestras de intestino delgado e intestino grueso fueron positivas. Un hallazgo interesante fue el reconocimiento de intensa reacción observada en el Estómago fetal de 20 semanas con el anticuerpo monoclonal P3.

En los órganos del sistema Cardiorrespiratorio obtuvimos que el  anticuerpo monoclonal P3 reconoció las muestras de tráquea y algunas muestra de Pulmón (Tabla No.3). Las intensidades  de las reacciones oscilaron  entre leve y moderada con predominio en Pulmón de fetos de mayor edad gestacional. En  el caso particular del  Pulmón pudimos  precisar el  reconocimiento  a nivel de las células epiteliales al ser cito queratina positiva, lo que habla a favor de que  son  células secretoras.

En el grupo  perteneciente a los órganos de otros sistemas, solo obtuvimos resultados apreciables en Suprarrenales con el anticuerpo monoclonal P3 (tabla  No.4). Las intensidades fueron leves. 

DISCUSIÓN

El estudio de la distribución de gangliósidos en el S.N.C. es un área de creciente interés, debido a los marcados cambios que experimenta su expresión durante el desarrollo.

La amplia distribución de gangliósidos demuestra que las células normales producen dichas moléculas y por lo tanto los anticuerpos monoclonales podrían reaccionar con el tejido normal.  Esto nos permite comprender porque se seleccionan anticuerpos monoclonales con escaso reconocimiento en tejidos normales. (11)

La distribución de gangliósidos no se limita a los tejidos normales, sino que son también sistematizados por las células tumorales de diferente origen, que en el proceso  de transformación neoplásica presentan cambios conformacionales, lo cual las hace “blanco” de los cambios monoclonales candidatos a ser utilizados en el diagnóstico y tratamiento de tumores de diferente origen.

Los anticuerpos monoclonales objeto de estudio muestran un patrón de reconocimiento especifico por algunos gangliósidos, fundamentalmente monosialogangliósidos.

El anticuerpo monoclonal A3 reconoce los monosialogangliósidos GM2 y GM1 de forma marcada y moderadamente al GM3. El GM1 pertenece a la serie ganglio y está incluido dentro de los gangliósidos mayores y por lo tanto es uno de los más comunes y mayormente distribuido en el S.N.C , junto al gangliósido GM3 se encuentran distribuidos en núcleos grises y sustancia blanca del cerebelo(10) y el GM3 en Médula Espinal, se expresa además en células epidérmicas(12)

La reacción del anticuerpo monoclonal A3 en órganos del S.N.C  se interpretó como el reconocimiento del gangliósido GM1 distribuido ampliamente en los mismos.

Al emplear anticuerpos monoclonales que reconocen estirpe celular localizamos la reactividad en las células en las células gliales, específicamente  en astrocitos, al ser la proteína Fibrilar Glial(GFAP) y la Vimentina, positivas respectivamente, lo cual concuerda con estudios anteriores(13)

El anticuerpo monoclonal P3 reconoce específicamente gangliósidos que contienen en su estructura el ácido N- Glicolilneuraminico, el cual ha sido detectado  en tejidos normales del humano(14,15,16) y sus derivados han sido encontrados en varios tipos de tumores de origen neuroectodérmico(17)

El P3 reconoce N glicosilados (18) aunque en estudios recientes se ha evidenciado un patrón de reconocimiento de gangliósidos sulfatados (19, 20).

El P3 reaccionó con muestras de órganos del S.N.C, sobre todo con Cerebelo, lo cual podría explicarse por el reconocimiento de gangliósidos sulfatados que se expresan  a este nivel.

El anticuerpo monoclonal E1 es especifico para la molécula de GM2, la cual esta pobremente distribuida en el S.N.C. Este gangliósido abunda en las primeras etapas del desarrollo en zonas especificas del S.N.C (21) Reaccionó con algunas células epiteliales del Pulmón, debido al reconocimiento del GM2 que pudiera expresarse a este nivel (22). Las intensidades de las reacciones oscilaron entre leve y moderada con predominio en Pulmón de fetos con mayor edad gestacional. En el caso particular del Pulmón pudimos precisar el reconocimiento a nivel de las células epiteliales, al ser citoqueratina positiva, lo que habla a favor de que son células secretoras.   

Al realizar el análisis de los datos recogidos en la literatura que concuerdan con algunos de los obtenidos en nuestro trabajo podemos finalmente concluir que:   

1-     Ontogenéticamente los gangliósidos cerebrales se expresan durante el período de 12 a 20 semanas del desarrollo. 

2-     El reconocimiento del anticuerpo monoclonal A3 de células gliales en tejido fetal así como la ausencia en su homologo adulto normal, permiten considerarlo como un posible Diagnosticador de Tumores de este origen. 

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ANEXOS

Tabla 1. Reconocimiento de los anticuerpos en tejido nervioso.

 Tabla 2. Reconocimiento en tejido del Sistema Digestivo.

 Tabla 3. Reconocimiento en tejido del Aparato Cardiorrespiratorio

Tabla 4. Reconocimiento en otros órganos.

 Leyenda

Casos positivos/ total de casos  

INSTITUTO DE CIENCIAS MÉDICAS DE LA HABANA

FACULTAD DE CIENCIAS MÉDICAS Dr. ALVADOR ALLENDE 

Autora: Bárbara R. Miranda Veitía* 

* Especialista de 1er. Grado en Embriología. Profesora Asistente. 

Ciudad de la Habana 2004