Resumen

El experimento fue realizado en el Centro de desarrollo mular El Mijial perteneciente a la Empresa Agropecuaria de Buey Arriba, provincia Gramma. Con el objetivo de evaluar la respuesta inmunológica y hematológica de animales portadores virémicos de Anemia Infecciosa Equina ante la aplicación del Levamisol como inmunoestimulante. Para el experimento se utilizaron 16 animales adultos entre 5 y 7 años de edad de la raza mestiza de Quater Horse, distribuidos según diseño de bloque al azar con arreglos factoriales, donde los factores considerados fueron: El tratamiento (Levamisol, 2 mg x kg de masa corporal), frecuencia de aplicación de los tratamientos (1 estimulación y 2 estimulaciones), estado de salud del animal (sanos y enfermos) y días de muestreos (0, 10, 20 y 30 días). Los resultados demuestran que el Levamisol ejercen un efecto inmunoestimulante en equinos (sanos y enfermos por AIE) por encima de los valores fisiológicos, alcanzado los mejores resultados entre los 10 y 20 días post inoculación, disminuyendo el efecto de estimulación a partir de los 30 días, por lo que se recomienda utilizar el inmunoestimulante en una frecuencia mensual.

Abstract

The experiment was realice in "Centro de desarrollo mular El mijial" belonginy to the "Empresa Agropecuaria of Buey Arriba" province Granma. The objetive is to value the inmunological and hematological response in bearus animals of the Equine Infectious Anaemia virus with the use of  Levamisol like inmunoestimulating. For the experiment was using 16 adults animals abaut 5 and 7 year of age of the Quater Horse, mixture race, they was distributing with a block desing, at random with factorials arragement, where the considerate factors were: the treatment (Levamisol, 2mg/kg of corporal weight ), frecuency of aplication of treatment (1 and 2 estimulations), animal health (healthy and sick) and test days (0, 10, 20 and 30 days). The effects has desmostrate that Levamisol prodoce an inmunoestimulating effect in equine (healthy or sick for AIE) over fisiologic values, haring the best effects between 10 and 20 days after the inoculation, decreasing the estimulation effect after 30 days, due to the decreasing of the estimulation effect is  recommendable the use of inmunoestimulant in a monthly frecuency. 

¿ Que es la AIE?

En la actualidad la tasa de prevalencia de la AIE en Cuba se comporta en un 18.6%, en el lugar donde se desarrolló esta investigación alcanzó una prevalencia del 40% y ha llegado a ser del 50% en años anteriores. Su importancia socio–económica esta dada en que esta especie es un elemento fundamental en nuestro desarrollo ganadero y planes agrícolas.

La Anemia Infecciosa Equina que cursa con efecto inmunodepresor y cuyo agente etiológico se ha convertido en un modelo de virus animal significativo para los estudios de persistencia vírica y las futuras investigaciones de la correlación Anemia Infecciosa Equina –  Síndrome de inmunodeficiencia adquirida (SIDA) y el que representa a su vez un puente de evolución entre los virus citolíticos y oncogénicos,  aparece como un modelo de particular importancia para la aplicación de sustancias que ayuden al refuerzo inmunológico (Cuellar y Rojas, 1987).

Ante esta situación y lo difícil que ha sido encontrar una solución que permita ponerle fin a esta enfermedad nuestro trabajo se ha propuesto el objetivo de evaluar la respuesta inmunológica y hematológica  de animales portadores virémicos de AIE ante la aplicación de Levamisol como inmunoestimulante.

Diseño del Experimento

El experimento fue realizado en el Centro de desarrollo mular El Mijial perteneciente a la Empresa Agropecuaria de Buey Arriba, provincia Gramma. Para el experimento se utilizaron 16 animales adultos entre 5 y 7 años de edad de la raza mestiza de Quater Horse  de los cuales la mitad era hembra y la otra mitad macho  distribuido según diseño completamente aleatorizado. Los grupos se dividieron para el trabajo experimental de la siguiente manera:

Los animales fueron estimulados con Levamisol a una dosis de 2 mg x kg de masa corporal, este se dividió en 2 grupos, el 1^ro de 8 animales sanos, que fue tomado como grupo control para este experimento y el 2^do de 8 animales enfermos, cada uno  se dividió en 2 subgrupos  de 4 animales, para estimular los  primeros con  una sola  frecuencia a los  0 días experimentales y los segundos en dos frecuencias a los 0 y 10 días experimentales. Todos los animales estaban sometidos al mismo régimen de alimentación y  manejo, siendo  observados diariamente.

Los muestreos  de sangre se realizaron a los 0, 10, 20 y 30 días  experimentales siempre en horario de la mañana y antes de consumir alimentos. Para las determinaciones hematológicas se tomaron 5 ml de sangre de cada animal extraídas por punción de la vena yugular y se depositaron en un tubo de ensayo con anticoagulante Heparina,  éstas incluyeron el valor del hematócrito según lo descrito por Sippel  (1959),  la hemoglobina por el método de cianometahemoglobina (Natelson,  1964),  el conteo total de leucocitos con la cámara de Newbauer y el diferencial sobre frotis teñidos por el método de Giemsa referido por Coffin (1966).

Para determinar la capacidad reaccional del sistema inmune se utilizó la coloración especial de Verde metil pironina que permite evaluar cualitativamente la síntesis de los ácidos nucleicos, para determinar la presencia de linfocitos T o B estimulados, según lo descrito por la norma 870-86.

Para la presentación de los resultados se confeccionaron  8  tablas y 1 gráfico en los que se incluyeron los valores después de un previo análisis estadístico, para el que se empleo un diseño de bloque al azar con arreglos factoriales, donde los factores considerados son: El tratamiento (Levamisol), frecuencia de aplicación del  tratamiento (1 estimulación y 2 estimulaciones), estado de salud del animal (sanos y enfermos) y días de muestreo (0, 10, 20 y 30 días), a los datos se les realizó un análisis de varianza con arreglo factorial, para ello se utilizó la prueba de Newman-Keuls para la comparación múltiple de medias  A (p<0,05). Se hicieron uso de los diagramas triangulares de Lerch (Lerch, 1987), para evaluar las diferencias esenciales entre los factores considerados. Todos los análisis estadísticos se realizaron con el paquete Statistica for Windows.

Síntesis de los resultados

En las tablas  #1 al analizar el índice de linfocitos se pueden observar que los animales enfermos presentan al inicio del experimento una linfocitosis característica de la enfermedad, los animales sanos por su parte se encuentran dentro del rango fisiológico. Una vez estimulados a los 10 días se comienza a producir una respuesta llegando a una linfocitosis en los animales sanos  la cual se mantiene en los enfermos. Aunque no existe una diferencia significativa a los 30 días post inoculación se comienza a observar un ligero descenso en el número de linfocitos (Ver Anexo 1). Este indicador no varía en dependencia de la frecuencia de estimulación.

TABLA # 1:  Efecto del Levamisol sobre el índice de linfocitos (%) de animales sanos (control) y enfermos en los distintos muestreos.

En las columnas, las medias con letras diferentes presentan diferencia significativa (pÐ 0.05), según prueba de Newman –Keuls.

Al analizar el efecto del Levamisol sobre  los  linfocitos estimulados (tabla #2) se refleja que después de la primera estimulación hay un aumento notable del porciento de linfocitos estimulados en todos los grupos observándose que los valores más relevantes se encuentran entre los 10 y 20 días experimentales, teniendo un ligero descenso a los 30 días. El porciento de linfocitos estimulados mantiene un comportamiento similar no influyendo el estado de salud y la frecuencia de estimulación.

TABLA #2:  Efecto del Levamisol sobre los linfocitos estimulados (%) de animales sanos (control) y enfermos en los distintos muestreos.

En las columnas, las medias con letras diferentes presentan diferencia significativa (pÐ 0.05), según prueba de Newman –Keuls.

En los resultados mostrados en las tablas #3 se observa  el incremento del número de linfocitos T estimulados, obteniéndose los mayores niveles entre los 10 y 20 días independientemente que los animales sean sanos o enfermos y de la frecuencia de administración, se  observan una disminución significativa en todos los grupos a los 30 días.

TABLA #3:  Efecto del Levamisol sobre los linfocitos T estimulados (%) de animales sanos (control) y enfermos en los distintos muestreos.

En las columnas, las medias con letras diferentes presentan diferencia significativa (pÐ 0.05), según prueba de Newman –Keuls.

Al analizar el efecto del Levamisol sobre el índice de linfocitos B (tabla #4)  se puede notar que no existe un cambio marcado que evidencie una respuesta a la estimulación. Las diferencias ocurren en un marco muy estrecho a pesar del incremento de los linfocitos estimulados. Los datos que se reflejan demuestran que  no hay influencia del Levamisol  en el número de linfocitos B.

 TABLA #4:  Efecto del Levamisol sobre los linfocitos B estimulados, de animales sanos (control) y enfermos, en los distintos muestreos.

En las columnas, las medias con letras diferentes presentan diferencia significativa (pÐ 0.05), según prueba de Newman –Keuls.

En el gráfico 1 al evaluar el comportamiento del conteo total de leucocitos  se observa que los animales enfermos presentaron una leucopenia al inicio del experimento y no ocurre así en los animales sanos, después de la estimulación con Levamisol ocurre un aumento de este indicador que se ubica en los valores fisiológicos (Ver Anexo 1).

Gráfico # 1.  Comportamiento del conteo total de leucocitos en los grupos estimulados con Levamisol.

(Días)

En el análisis de la hemoglobina y el hematocrito no se  encontraron diferencias significativas atendiendo a los factores evaluados, como se sabe estos no están sujetos a variaciones por la acción directa del estimulante. Se pudo observar que en los enfermos los valores de  hemoglobina están por debajo de los fisiológicos aun después de la estimulación, mientras los sanos se encuentran en el rango normal para la especie. (Ver Anexo 1).

Según los resultados obtenidos se llegó a las siguientes conclusiones:

·          El Levamisol es una sustancia que en dosis bajas  estimula la respuesta inmunológica de equinos sanos y afectados por el virus de la AIE.

·          La mejor respuesta  se obtiene entre los 10 y 20 días, donde se alcanzan los mayores niveles de linfocitos T activados, el descenso comienza a ocurrir cerca de los 30 días.

·          La aplicación de una o dos estimulaciones no influye de forma significativa en los resultados obtenidos en el experimento.

·          La utilización de esto fármaco provoca un aumento significativo del número de linfocitos circulantes.

·          Los animales con el número total de leucocitos disminuidos pueden recuperarse.

   Se recomienda la utilización de Levamisol para estimular el sistema inmune de los animales afectados por el virus de la AIE.

  Teniendo en cuenta que a los 30 días comienza a disminuir la respuesta a la estimulación  se debe realizar una inoculación mensual para mantener  estable la respuesta del sistema inmune.

   Por las importantes pérdidas económicas que ocasiona esta enfermedad y lo factible  que es la aplicación  de estos tratamientos se hace necesario extenderlos a toda la masa afectada, así como, utilizarlos como profilácticos en los animales susceptibles.

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Autores:

Dra. M. V. Yulien Fernández Romay; Dr.  M. V. Raúl Martínez Velázquez.